Принсипи таҷриба
Ҳадафи электрофорези гемоглобин барои муайян ва тасдиқи гемоглобинҳои муқаррарӣ ва ғайримуқаррарӣ.
Аз сабаби гуногун будани зарядҳо ва нуқтаҳои изоэлектрикии навъҳои гуногуни гемоглобин, дар маҳлули муайяни буферии рН, вақте нуқтаи изоэлектрикии гемоглобин аз рН-и маҳлули буферӣ пасттар аст, гемоглобин ҳангоми электрофорез заряди манфӣ дошта, ба сӯи анод ҳаракат мекунад. Баръакс, гемоглобин бо заряди мусбат ба сӯи катод ҳаракат мекунад.
Дар зери шиддати муайян ва пас аз вақти муайяни электрофорез, гемоглобинҳо бо зарядҳо ва вазнҳои молекулавии гуногун самтҳо ва суръати муҳоҷиратро нишон медиҳанд. Ин имкон медиҳад, ки минтақаҳои ҷудогона ҷудо карда шаванд ва минбаъд дар ин минтақаҳо таҳлили сканерии колориметрӣ ё электрофоретикӣ барои муайян кардани миқдори гемоглобинҳои гуногун гузаронида мешавад. Усули бештар истифодашаванда электрофорези мембранаи целлюлоза ацетат pH 8.6 мебошад.
Дар дохили ситоплазма гурўњњои этиленгликолї (CHOH-CHOH), ки дар моддањои гликоген ё полисахаридњо (аз ќабили мукополисахаридњо, мукопротеинњо, гликопротеинњо, гликолипидњо ва ѓ.) мављуданд, бо кислотањои даврї оксид шуда, ба гурўњњои алдегид (CHO-CHO) табдил меёбанд. Ин гурӯҳҳои алдегидҳо бо реагенти арғувони сурхи Шифф омехта шуда, ранги арғувон-сурхро ташкил медиҳанд, ки дар он ҷо полисахаридҳо дар ҳуҷайра мавҷуданд. Ин реаксия ҳамчун рангкунии даврии кислотаи Шифф (PAS) маълум аст, ки қаблан рангкунии гликоген номида мешуд.
Усули таҷриба
Маводҳо:Ацетат целлюлозамбран, аппарати электрофорез(DYCP-38C ва таъминоти барқ DYY-6C), Воситаи олии боркунии намуна(пипетка), спектрофотометр, кюветхои колориметрй, буферҳо.
Буфер:
(1) Буфери pH 8,6 TEB: 10,29 г Трис, 0,6 г EDTA, 3,2 г кислотаи борро вазн кунед ва оби тозашударо ба 1000 мл илова кунед.
(2) Буфери боратӣ: 6,87 г борак ва 5,56 г кислотаи бор вазн кунед ва ба 1000 мл оби соф илова кунед.
Тартиб:
Pбарқарорсозии маҳлули гемоглобин
3 мл хуни дорои гепарин ё цитрати натрийро ҳамчун антикоагулянт гиред. Дар 2000 чархзанӣ барои 10 дақиқа центрифуга кунед ва плазмаро партояд. Ҳуҷайраҳои сурхи хунро се маротиба бо намакҳои физиологӣ бишӯед (ҳар дафъа 750 чархзанӣ, 5 дақиқа центрифуга). Дар 2200 чархзанӣ барои 10 дақиқа центрифуга кунед ва супернатантро партоед. Ба микдори баробар оби соф андохта, баъд аз он 0,5 маротиба зиёдтар чор хлориди карбон илова кунед. Барои 5 дақиқа сахт такон диҳед ва сипас дар 2200 чархзанӣ барои 10 дақиқа центрифуга кунед, то маҳлули болоии Hb-ро барои истифодаи минбаъда ҷамъ кунед.
Гирифтани мембрана
Мембранаи ацетати целлюлозаро ба тасмаҳои андозаи 3 см × 8 см буред. Онҳоро дар буфери pH 8,6 TEB то пурра сер шудан тар кунед, сипас хориҷ кунед ва бо коғази филтр хушк кунед.
Доғдоршавӣ
Бо пипетка 10 мкл маҳлули гемоглобинро амудӣ ба мембранаи ацетат селлюлоза (тарафи ноҳамвор), тақрибан 1,5 см аз канори он ҷойгир кунед.
Электрофорез
Маҳлули буферии боратро ба камераи электрофорез резед. Мембранаи ацетати целлюлозаро бо тарафи доғдор дар охири катодҳои камера ҷойгир кунед. Дар 200 В барои 30 дақиқа кор кунед.
Элюция
Минтақаҳои HbA ва HbA2-ро буред, онҳоро дар пробиркаҳои алоҳида ҷойгир кунед ва мутаносибан 15 мл ва 3 мл оби соф илова кунед. Бодиққат такон диҳед, то гемоглобинро пурра ҷудо кунед, сипас омехта кунед.
Колориметрия
Бо истифода аз оби софшуда барои маҳлули элюсия абсорбенсро сифр кунед ва абсорбенсро дар 415 нм чен кунед.
Ҳисобкунӣ
HbA2(%) = Ҷабби найи HbA2 / (Ҷаббиши найи HbA × 5 + Абсорбсияи найи HbA2) × 100%
Ҳисобкунии натиҷаҳои таҷрибавӣ
Диапазони истинод барои pH 8.6 TEB буферии селлюлоза ацетат электрофорез: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%
Қайдҳо
Вақти электрофорез набояд аз ҳад зиёд бошад. Мембранаи ацетати целлюлоза дар вакти электрофорез набояд хушк шавад. Вақте ки HbA ва HbA2 ба таври равшан ҷудо мешаванд, электрофорезро қатъ кунед. Электрофорези тӯлонӣ метавонад боиси паҳншавии банд ва норавшан гардад.
Аз истифодаи намунаи аз ҳад зиёд худдорӣ намоед. Моеъи аз ҳад зиёди гемоглобин метавонад ба ҷудошавии банд ё рангкунии нокифоя оварда расонад, ки боиси бардурӯғ баланд шудани сатҳи HbA гардад.
ифлосшавии мембранаи ацетати целлюлозаро бо сафедахо пешгирй кунед.
Ҷараён набояд аз ҳад зиёд бошад; дар акси ҳол, бандҳои гемоглобин наметавонанд аз ҳам ҷудо шаванд.
Ҳамеша намунаҳоро аз шахсони муқаррарӣ ва гемоглобинҳои ғайримуқаррарии заруриро ҳамчун назорат дохил кунед.
Beijing Liuyi Biotechnology як зарфи касбии электрофорезро барои электрофорези гемоглобин истеҳсол мекунад, ки ин модел астDYCP-38Cзарфи электрофорези мембранаи селлюлоза ацетат ва ду модели таъминоти нерӯи электрофорез барои зарфи электрофорези мембранаи селлюлоза ацетат мавҷуд астРУЗ-2СваРУЗ-6Стаъмини нерӯ.
Дар ҳамин ҳол, Пекин Liuyi Biotechnology барои муштариён мембранаи ацетати селлюлозаро таъмин мекунад ва андозаи мембранаи ацетати селлюлоза метавонад фармоиш дода шавад. Хуш омадед ба мо барои намунаҳо ва маълумоти бештар пурсед.
Бренди Beijing Liuyi дар Чин таърихи беш аз 50-сола дорад ва ширкат метавонад дар тамоми ҷаҳон маҳсулоти устувор ва босифатро таъмин намояд. Дар тӯли солҳои рушд, он сазовори интихоби шумост!
Ҳоло мо шариконро меҷӯем, ҳам зарфи электрофорези OEM ва ҳам дистрибюторҳо истиқбол мешаванд.
Агар шумо ягон нақшаи хариди маҳсулоти моро дошта бошед, лутфан бо мо тамос гиред. Шумо метавонед ба мо тавассути почтаи электронӣ паём фиристед[почтаи электронӣ ҳифз шудааст]ё[почтаи электронӣ ҳифз шудааст], ё лутфан ба мо занг занед +86 15810650221 ё Whatsapp +86 15810650221 ё Wechat: 15810650221 илова кунед
Вақти фиристодан: сентябр-20-2023