Электрофорези гели полиакриламид
Электрофорези гел як усули бунёдӣ дар лабораторияҳо дар тамоми фанҳои биологӣ мебошад, ки имкон медиҳад, ки макромолекулаҳо ба монанди ДНК, РНК ва сафедаҳо ҷудо карда шаванд. Воситаҳо ва механизмҳои гуногуни ҷудокунӣ имкон медиҳанд, ки зергурӯҳҳои ин молекулаҳо бо истифода аз хусусиятҳои физикии онҳо самараноктар ҷудо карда шаванд. Барои сафедаҳо, махсусан, электрофорези гели полиакриламидӣ (PAGE) аксар вақт усули интихоб аст.
PAGE як усулест, ки макромолекулаҳо ба монанди сафедаҳо дар асоси ҳаракати электрофоретикии онҳо, яъне қобилияти таҳлилгарон ба сӯи электроди заряди муқобил ҳаракат мекунад. Дар PAGE, ин бо заряд, андоза (вазни молекулавӣ) ва шакли молекула муайян карда мешавад. Таҳлилҳо тавассути сӯрохиҳои дар гели полиакриламид ташкилшуда ҳаракат мекунанд. Баръакси ДНК ва РНК, сафедаҳо вобаста ба аминокислотаҳои дохилшуда масъуланд, ки метавонанд ба кори онҳо таъсир расонанд. Сатрҳои аминокислотаҳо инчунин метавонанд сохторҳои дуюмдараҷаро ба вуҷуд оранд, ки ба андозаи намоёни онҳо таъсир расонанд ва дар натиҷа онҳо чӣ гуна метавонанд тавассути сӯрохиҳо ҳаракат кунанд. Аз ин рӯ, баъзан мумкин аст, ки сафедаҳо пеш аз электрофорез денатурат карда шаванд, то онҳо хаттӣ шаванд, агар баҳодиҳии дақиқи андоза талаб карда шавад.
САХИФАИ SDS
Электрофорези гели полиакриламиди натрий-додецилсулфат як усулест, ки барои ҷудо кардани молекулаҳои сафедаи массаҳои аз 5 то 250 кДа истифода мешавад. Сафедаҳо танҳо аз рӯи вазни молекулавии онҳо ҷудо карда мешаванд. Дар тайёр кардани гелҳо, сульфати натрий додецил, як сурфактанти анионӣ илова карда мешавад, ки зарядҳои дохилии намунаҳои сафедаҳоро ниқоб мекунанд ва ба онҳо заряд ба таносуби масса медиҳад. Бо ибораи оддӣ, он сафедаҳоро денатурат мекунад ва ба онҳо заряди манфӣ медиҳад.
Саҳифаи аслӣ
Native PAGE як усулест, ки барои ҷудо кардани сафедаҳо гелҳои денатуратшударо истифода мебарад. Баръакси SDS PAGE, дар тайёр кардани гелҳо ягон агенти денатуринг илова карда намешавад. Дар натиҷа, ҷудошавии сафедаҳо дар асоси заряд ва андозаи сафедаҳо сурат мегирад. Дар ин техника, конформатсия, қабатшавӣ ва занҷирҳои аминокислотаи сафедаҳо омилҳое мебошанд, ки ҷудошавӣ аз он вобаста аст. Сафедаҳо дар ин раванд осеб намебинанд ва пас аз ба итмом расидани ҷудошавӣ барқарор карда мешаванд.
Электрофорези гели полиакриламидӣ (PAGE) чӣ гуна кор мекунад?
Принсипи асосии PAGE ҷудо кардани таҳлилҳо тавассути гузариши онҳо аз сӯрохиҳои гели полиакриламидӣ бо истифода аз ҷараёни электрикӣ мебошад. Барои ноил шудан ба ин, омехтаи акриламид-бисакриламид бо илова кардани персулфат аммоний (APS) полимеризатсия карда мешавад (полиакриламид). Реаксия, ки тавассути тетраметилэтилендиамин (TEMED) катализ карда мешавад, як сохтори тӯрро ба вуҷуд меорад, ки сӯрохҳо дорад, ки тавассути он таҳлилҳо метавонанд ҳаракат кунанд (Расми 2). Чӣ қадаре ки фоизи умумии акриламиди ба гел дохилшуда зиёдтар бошад, андозаи сӯрохиҳо ҳамон қадар хурдтар мешавад, аз ин рӯ сафедаҳо, ки метавонанд аз онҳо гузаранд, хурдтар мешаванд. Таносуби акриламид ба бисакриламид низ ба андозаи сӯрохиҳо таъсир мерасонад, аммо ин аксар вақт доимӣ нигоҳ дошта мешавад. Андозаҳои хурдтари сӯрохҳо инчунин суръати ҳаракати сафедаҳои хурдро тавассути гел коҳиш медиҳанд, ҳалли онҳоро беҳтар мекунанд ва ҳангоми ҷорӣ кардани ҷараён зуд ба буфер рафтани онҳоро пешгирӣ мекунанд.
Таҷҳизот барои электрофорези гели полиакриламид
Ҳуҷайраи электрофорези гелӣ (танк / камера)
Зарфи гел барои электрофорези гели полиакриламидӣ (PAGE) аз зарфи гели агарозӣ фарқ мекунад. Зарфи гели агароз уфуқӣ аст, дар ҳоле ки зарфи PAGE амудӣ аст. Тавассути ҳуҷайраи электрофорези амудӣ (бак/камера) як гели борик (одатан 1,0мм ё 1,5мм) дар байни ду пластинкаи шишагӣ рехта мешавад ва васл карда мешавад, то поёни гел дар буфер дар як камера ва болоаш дар буфер ғарқ шавад. дар палатаи дигар. Вақте ки ҷорӣ ҷорӣ мешавад, миқдори ками буфер тавассути гел аз камераи боло ба камераи поёнӣ мегузарад. Бо тазиқи қавӣ барои кафолат додани он, ки васила дар ҳолати амудӣ нигоҳ дошта мешавад, таҷҳизот ҳаракати тези гелро бо ҳатто хунуккунӣ осон мекунад, ки дар натиҷа тасмаҳои гуногун пайдо мешаванд.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) як қатор андозаҳои ҳуҷайраҳои электрофорези полиакриламидиро (бакҳо/камераҳо) истеҳсол мекунад. Моделҳои DYCZ-20C ва DYCZ-20G ҳуҷайраҳои электрофорези амудӣ (танкҳо/камераҳо) барои таҳлили пайдарпайии ДНК мебошанд. Баъзе ҳуҷайраҳои электрофорези амудӣ (танкҳо/камераҳо) бо системаи blotting мувофиқанд, ба монанди модели DYCZ-24DN, DYCZ-25D ва DYCZ-25E бо модели системаи Western Blotting DYCZ-40D, DYCZ-40G ва DYCZ-40F мувофиқанд, ки барои гузарондани молекулаи сафеда аз гел ба мембрана истифода мешаванд. Пас аз электрофорези SDS-PAGE, Western Blotting як усули муайян кардани сафедаи мушаххас дар омехтаи сафеда мебошад. Шумо метавонед ин системаҳои blotting-ро мувофиқи талаботи таҷрибавӣ интихоб кунед.
Таъмини барқи электрофорез
Барои таъмин кардани қувваи барқ барои кор кардани гел, ба шумо таъминоти барқии электрофорез лозим аст. Дар Liuyi Biotechnology мо як қатор таъминоти барқии электрофорезро барои ҳама барномаҳо таъмин мекунем. Модели DYY-12 ва DYY-12C бо шиддати устувори баланд ва ҷараён метавонад ба талаботи электрофорези баландшиддат ҷавобгӯ бошад. Он дорои вазифаи стенд, вақт, VH ва қадам ба қадам татбиқ. Онҳо барои татбиқи электрофорези IEF ва пайдарпаии ДНК беҳтаринанд. Барои татбиқи электрофорези умумии сафеда ва ДНК, мо модели DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 ва ғайра дорем, ки онҳо инчунин таъминоти гарми барқ бо ҳуҷайраҳои электрофорез (зарфҳо / камераҳо) мебошанд. Инҳоро метавон барои барномаҳои электрофорези миёна ва пастшиддати барқ, аз қабили барои лабораторияи мактаб, лабораторияи беморхона ва ғайра истифода бурд. Моделҳои бештар барои таъминоти барқ, лутфан ба вебсайти мо муроҷиат кунед.
Бренди Liuyi дар Чин таърихи беш аз 50-сола дорад ва ширкат метавонад дар тамоми ҷаҳон маҳсулоти устувор ва босифатро таъмин намояд. Тавассути рушди солҳо, он сазовори интихоби шумост!
Барои маълумоти бештар дар бораи мо, лутфан бо мо тавассути почтаи электронӣ тамос гиред[почтаи электронӣ ҳифз шудааст] or [почтаи электронӣ ҳифз шудааст].
Иқтибосҳо барои электрофорези гели полиакриламидӣ чист?
1. Карен Стюард PhD электрофорези гели полиакриламидӣ, он чӣ гуна кор мекунад, вариантҳои техника ва татбиқи он
Вақти фиристодан: 23 май-2022